Apostle MiniMax™ 성능 및 데이터

액체 생체 검사를 위해 혈장에서 Cell-Free DNA 분리

Apostle MiniMax™ 고효율 cfDNA 분리 키트(표준형)는 자성 비드 기반 기술을 기반으로 하는 cell-free DNA(cfDNA) 분리 시약 키트입니다. Apostle MiniMax™는 수동 및 자동 워크플로우 모두에서 인간의 혈장의 cfDNA를 정제하는 기능을 입증 받았습니다.

  • 혈장 1-5ml에서 얻은 결과를 나타내는 데이터
  • 다양한 수집 튜브와의 호환성 입증
  • 다운스트림 PCR 기반 분석에 적합한 것으로 나타난 cfDNA 순도

다양한 수집 튜브에서 수집된 혈장

그림 1(아래): Apostle MiniMax 및 업계에서 널리 사용되는 다른 컬럼 기반 키트(키트 A)를 사용하여 cfDNA 튜브 1 및 cfDNA 튜브 2에서 수집된 1mL의 혈장에서 DNA를 추출했습니다. 또한 Apostle MiniMax 및 업계에서 널리 사용되는 다른 컬럼 기반 키트(키트 A) 및 두 번째 비드 기반 키트(키트 B)를 사용하여 EDTA 수집 튜브에 수집한 혈장 1mL에서 DNA를 추출했습니다. Quant-iT PicoGreen dsDNA 분석 키트(Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 DNA 수율을 측정하였습니다. 오차 막대는 세 가지 반복 실험의 표준편차를 나타냅니다. 각 튜브마다 Apostle MiniMax는 총수율이 더 높은 DNA를 추출했습니다. DNA 크기는 Agilent Bioanalyzer 2100에서 분석되었습니다. 세 가지 튜브 유형 모두에서 Bioanlyzer 진행 결과는 추출된 DNA가 cfDNA의 예상 크기(~170 bp)와 상관 관계가 있음을 나타냅니다.

혈장에서 얻은 Genomics cfDNA 수율

그림 1

뛰어난 재현성

그림 2(아래): Apostle MiniMax 및 다른 키트를 하나 사용하여 cfDNA 튜브 1에 수집된 1mL의 혈장에서 DNA를 추출했습니다. 이 두 가지는 기술적인 복제물이며 Apostle MiniMax™를 사용하여 추출한 두 복제물은 정확히 동일하지만 키트 A를 사용하여 추출한 DNA에는 두 가지 상이한 진행 결과가 나타났습니다. 분리된 cfDNA는 Agilent Bioanalyzer 2100에서 특성화되었습니다. 35 및 10380에서의 피크는 내부 마커입니다.

 

혈장에서 얻은 Genomics cfDNA 재현성

그림 2

 

그림 3(데이터 세트 A)에서 cfDNA는 Apostle MiniMax(빨간색 곡선) 및 시장에서 널리 사용되는 컬럼 기반 키트(파란색 곡선)를 이용해 4mL 무세포 혈장에서 분리되었습니다. 분리된 cfDNA는 Bioanalyzer 2100으로 분석 합니다. 데이터 세트 B에서 cfDNA는 Apostle MiniMax(빨간색 곡선) 및 시장에서 널리 사용되는 컬럼 기반 키트(파란색 곡선)를 이용해 20mL의 세포가 없는 소변에서 분리되었습니다. 분리된 cfDNA는 ~170bp에서 더 높은 피크로 표시된 것처럼 Bioanalyzer 2100로 분석 합니다. 35 및 10380의 피크는 내부 마커입니다. 혈장 및 소변 샘플에서 모두 Apostle MiniMax의 성능이 주요 비교 제품보다 우수했습니다.

 

Genomics cfDNA 분리 특성화

그림 3

 

DNA 돌연변이 검출 및 qPCR 성능

그림 4(왼쪽 아래)에서 EGFR C2573T> G L858R 돌연변이를 포함한 170bp 합성 DNA 조각 20μL를 1ng/L에서  0.001ng/µL 사이 범위의 농도에서 1mL의 TE 완충액(파란색) 또는 혈청(빨간색)에 섞었습니다. Apostle MiniMax™를 사용하여 조각을 분리했습니다. A)는 증폭된 플롯으로, 분리된 돌연변이 DNA 조각과 다른 용도의 처음 DNA 용액에 대한 곡선이 매우 중첩되는 것을 보여줍니다. 또한 B)는 Aposlte MiniMax™가 처리할 수 있는 DNA 양을 측정합니다. qPCR 표준 곡선은 오리지널 DNA를 이용해 작성했습니다. DNA 분리 회수율은 90%보다 높은 것으로 계산되었습니다. 그림 5(오른쪽 아래)에서 Apostle MiniMax™와 다른 업계 최고의 컬럼 기반 키트(키트 A) 간에 qPCR 성능을 비교했습니다. Apostle MiniMax™는 제시된 3개의 수집 튜브에서 추출한 DNA를 기준으로 키트 A보다 성능이 우수했습니다.

Genomics cfDNA 돌연변이 감지

그림 4

Genomics cfDNA qPCR 성능

그림 5

입력량에 따른 DNA 수율 증가

그림 6 (아래)에서 EDTA 튜브 Apostle MiniMax에 수집된 1, 3 및 5 mL의 혈장에서 DNA를 추출했습니다. Apostle MiniMax를 사용하는 경우 입력량에 따라 DNA 수율이 증가합니다.™ Quant-iT PicoGreen dsDNA 분석 키트(Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 DNA 수율을 측정하였습니다. 오차 막대는 세 가지 반복 실험의 표준편차를 나타냅니다.

 

Genomics cfDNA 수율 입력량

그림 6

 

시각적 워크플로우

Genomics cfDNA Apostle MiniMax 워크플로우

  1. 혈장 용해
  2. cfDNA를 자성 비드에 결합
  3. 오염 물질로부터 자성 비드 분리
  4. 세척액으로 자성 비드 세척
  5. 세척액으로 자성 비드 2번째 세척
  6. 자성 비드에서 cfDNA를 용출

제품: Apostle MiniMax™ 고효율 cfDNA 분리 키트(표준형)

Apostle MiniMax™은 처리량에 따라 세 가지 크기의 시약 키트로 제공됩니다.

부품 번호 이름 PREP
C40603 Apostle MiniMax™ 50
C40604 Apostle MiniMax™ 10
C40605 Apostle MiniMax™ 대용량 50

 

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