RNAdvance Blood Performance and Data
RNA 안정화 혈액 수집 튜브에서 RNA 추출
RNAdvance Blood 키트는 SPRI 상자성 비드 기반 기술을 기반으로 하는 리보 핵산(RNA) 분리 시약 키트입니다. PAXgene 튜브를 사용하여 수집한 혈액에서 고품질 RNA를 정제합니다. 이 추출 방법은 2mL 튜브 형식 또는 96-웰 형식으로 수동으로 실행하거나 벡크만쿨터의 다양한 Biomek 액체 핸들링 워크스테이션에서 96-웰 형식으로 자동화할 수 있습니다. RNAdvance Blood 키트를 사용하여 PAXgene 보존 혈액에서 추출한 전체 RNA에는 gDNA 및 기타 PCR 억제제가 없습니다.
- 다운스트림 PCR 기반 분석과 호환
- 고품질의 RNA 생산
- 게놈 DNA 및 기타 오염 물질을 효과적으로 제거
일관적인 샘플 간 RNA 무결성
동일한 날짜에 동일한 기증자에게서 얻은 세 개의 튜브에서 샘플을 채취했습니다. 모든 샘플은 6시간 이내에 준비되었고, 혈액은 RNA를 추출하기 전에 얼음통 안에 넣거나 온도를 4℃로 유지했습니다. 준비된 샘플 9개의 RIN 점수는 평균 9.4이고 표준 편차는 0.4였습니다. RIN 점수는 Bioanalyzer 6000 RNA Nano Assay(Agilent)를 사용하여 평가되었습니다.
RNAdvance Blood는 다른 공급업체보다 더 높은 수율로 RNA를 분리합니다.
그림 3(아래)에서는 NanoDrop(Thermo Fisher Scientific)을 사용하여 샘플을 측정했습니다. RNAdvance Blood 키트는 공급업체 B와 C의 키트에 비해 RNA 분리량이 2배나 더 많았습니다. 그림 4(아래)에서는 NanoDrop(Thermo Fisher Scientific)을 사용하여 순도를 측정했습니다. 오차 막대는 세 가지 기술 반복 실험의 표준편차를 나타냅니다. RNAdvance Blood로 분리한 RNA는 다운스트림 작업에서 사용하기에 적합합니다.
RNAdvance의 일관된 성능
그림 5(아래)에서는 24시간 내에 2 명의 사용자가 6명의 기증자에게서 RNA를 추출했습니다. NanoDrop(Thermo Fisher Scientific)를 사용하여 샘플을 측정했습니다. 두 사용자 모두 비슷한 양의 RNA를 추출했습니다. 오차 막대는 세 가지 기술 반복 실험의 표준편차를 나타냅니다.
RNAdvance, 다운스트림 작업을 위해 DNA 및 PCR 억제제 제거
PCR 기능은 베타(β)-액틴 유전자(ActB)의 Exon 4 및 5에 걸쳐 327 base pair 앰플리콘을 생성하도록 설계된 프라이머 세트(전방 프라이머 5´-ggacttcgagcaagagatgg-3´ 및 역방향 프라이머 5´-agcactgtgttggcgtacag-3´)를 사용하여 qRT-PCR을 통해 평가되었습니다. 그림 6(아래)에서 통제되지 않은 RT는 다운스트림 RNA 작업에 방해가 될 수 있는 DNA가 제거되었음을 보여줍니다. 그림 7(아래)에서 RNAdvance Blood 키트를 사용하여 분리한 RNA는 증폭이 가능하며 이 키트가 PCR 억제제를 제거했음을 나타냅니다.
RNAdvance는 최대 4일 동안 PAXgene Tube에서 수집한 혈액에서 고품질의 RNA를 다량으로 분리합니다.
기증 후 4일 동안 6명의 기증자에게서 RNA를 추출했습니다. 혈액은 PaxGene RNA 튜브로 수집하고 4°C에 보관했습니다. 그림 8(아래)에서 RNA 수율은 400L의 혈액에 대해 일관되게 RNA 1μg으로 나타났습니다. 1일차에 비해 2일에서 4일까지의 기증자 변동성이 더 높았습니다. 그림 9(아래)에서 순도는 4일 동안 크게 변하지 않았으며 다운스트림 작업에 적합했습니다. 오차 막대는 세 가지 기술 반복 실험의 표준편차를 나타냅니다.
시각적 워크플로우
- 융해 완충제 및 단백질 분해 효소 K를 사용하여 PAXgene 튜브에서 수집된 혈액 용해
- RNA를 자성 비드에 결합
- 오염 물질로부터 자성 비드 분리
- 오염 물질을 제거하기 위해 세척 완충제 및 70% 에탄올로 자성 비드 세척
- 샘플을 DNase로 처리
- Bind 2 Buffer를 사용하여 RNA를 자성 비드에 재결합
- 오염 물질을 제거하기 위해 70% 에탄올로 자성 비드 세척
- 자성 비드에서 RNA를 용출
- 새로운 플레이트로 이동
컬럼 기반 키트 사용자 대비 적은 피펫 작업으로 짧은 시간 안에 샘플에서 RNA 추출
그림 10(위)은 RNAdvance Blood 또는 컬럼 기반 공급업체를 사용하여 1-96개 샘플에 대해 RNA를 추출한 총 시간을 나타냅니다. RNAdvance Blood를 사용하면 15개의 샘플에서도 혈액에서 RNA를 추출하는 총 시간이 단축됩니다. 그림 11(위)는 1, 8, 24, 48 및 96개 샘플에 필요한 샘플 내 분배, 샘플 혼합 및 팁 폐기를 포함하는 총 피펫 작업 수를 보여줍니다. 복수 채널 피펫을 사용할 수 있어 컬럼 기반 공급업체 키트보다 피펫 작업이 훨씬 적습니다.
배치 크기 또는 전체 처리량을 기준으로 수동 또는 자동화 방법에 사용
다음은 8, 24, 48 및 96 RNAdvance Blood RNA 추출을 수행하는 데 필요한 예상 실습 시간 및 총 시간(시간)입니다. 화학 반응은 액체 핸들링 워크스테이션에서 수동 또는 자동으로 수행할 수 있습니다. 이 표에 표시된 데이터는 Biomek i7 하이브리드 지노믹 워크스테이션을 기반으로 합니다. 수동과 자동화의 시간 차이를 확인할 수 있습니다(NR=권장되지 않음).
| RNAdvance Blood | 수동 | 자동화 | ||
|---|---|---|---|---|
| 배치 크기 | 8 | 수동 시간 | 1.00 | 0.25 |
| 총 시간 | 1.50 | 2.50 | ||
| 24 | 수동 시간 | 1.50 | 0.25 | |
| 총 시간 | 2.00 | 2.50 | ||
| 48 | 수동 시간 | NR | 0.25 | |
| 총 시간 | NR | 2.50 | ||
| 96 | 수동 시간 | NR | 0.25 | |
| 총 시간 | NR | 3.00 | ||
혈액에서 RNA를 분리하기 위한 RNAdvance Blood 제품
RNAdvance Blood는 처리량 요구에 따라 세 가지 크기의 키트로 제공됩니다. 구매하거나 견적을 요청하려면 아래의 특정 부품 번호를 클릭하십시오. 자세한 내용은 RNAdvance이 포함된 조직에서 RNA 분리 페이지를 참조하십시오.
| 부품 번호 | 이름 | PREP |
|---|---|---|
| A35603 | RNAdvance Blood 키트 | 50 |
| A35605 | RNAdvance Blood 키트 | 96 |
| A35604 | RNAdvance Blood 키트 | 384 |
질병 또는 기타 상태의 진단 용도로 의도되거나 검증되지 않았습니다.
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