RNAdvance Tissue 성능 및 데이터

조직에서 전체 RNA 추출

RNAdvance Tissue 키트는 SPRI 상자성 비드 기반 기술을 기반으로 하는 리보 핵산(RNA) 분리 시약 키트입니다. 유기 용매의 위험 및 폐기물 제거 문제에 대한 우려가 없으며, 시간이 많이 걸리고 손이 많이 가는 진공 여과 및 원심분리 단계 없이 다양한 조직에서 전체 RNA를 추출할 수 있습니다. 이 추출 방법은 2mL 튜브 형식 또는 96-웰 형식으로 수동으로 실행하거나 벡크만쿨터의 다양한 Biomek 자동화 워크스테이션에서 96-웰 형식으로 자동화할 수 있습니다. 이 추출 프로세스는 아래 제시된 데이터를 대상으로 수행된 실험에서 전통적인 컬럼 기반 접근법에 비해 총 RNA 회수율이 높았습니다.

  • 다운스트림 PCR 기반 작업과 호환
  • 다양한 조직 유형에서 고품질 RNA 추출 및 정제
  • 지노믹 DNA 및 기타 오염 물질을 효과적으로 제거

순도를 저해하지 않고 다양한 조직 유형에서 높은 비율로 RNA 회수

Genomics RNAdvance Tissue Total RNA 수율

그림 1

Genomics RNAdvance Tissue Total RNA 순도

그림 2

RNAdvance Tissue 및 상용화된 기타 키트를 사용하여 뇌, 간, 폐, 신장 또는 꼬리 조직 10mg에서 RNA를 추출했습니다. 그림 1(위)에서는 NanoDrop(Thermo Fisher Scientific)을 사용하여 RNA 수율을 측정했습니다. RNAdvance Tissue는 다른 상용화된 키트에 사용된 5가지 조직 유형에서 더 많은 양의 RNA를 회수했습니다. 그림 2(위)에서는 NanoDrop(Thermo Fisher Scientific)을 사용하여 샘플을 평가했습니다. RNAdvance Tissue는 모든 조직 유형에서 만족스러운 수준의 A260/280 비율로 RNA를 정제했습니다.

뛰어난 RNA 품질

RNAdvance Tissue를 사용하여 10mg의 뇌 조직에서 추출한 RNA로 Agilent 2100 Bioanalyzer Eukaryote Total RNA Nano chip에서 작업을 수행했습니다. 아래의 그림 3 및 4에는 뇌 조직에서 추출한 RNA 2개에 대한 그래프가 표시되어 있습니다. RIN 점수는 9보다 높았으며, 이는 고품질 및 온전한 RNA가 회수되었음을 나타냅니다.

Genomics RNAdvance Tissue RIN 점수 그림 3

그림 3

Genomics RNAdvance Tissue RIN 점수 그림 4

그림 4

RNAdvance Tissue는 다운스트림 PCR 작업에 적합한 RNA를 제공합니다.

PCR 증폭 가능성은 베타(β)-액틴 유전자(ActB)의 Exon 4 및 5에 걸쳐 327 base pair 앰플리콘을 생성하도록 설계된 프라이머 세트(전방 프라이머 5´-gacttcgagcaagagatgg-3´ 및 역방향 프라이머 5´-agcactgtgttggcgtacag-3´)를 사용하여 qRT-PCR을 통해 평가되었습니다. 그림 5(아래)에서 통제되지 않은 RT는 다운스트림 RNA 작업에 방해가 될 수 있는 DNA가 제거되었음을 보여줍니다. 그림 6(아래)에서 RNAdvance Tissue 키트를 사용하여 분리한 RNA는 증폭이 가능하며 이 키트가 PCR 억제제를 제거했음을 나타냅니다. 이러한 결과는 다운스트림 PCR 작업에 RNA를 사용할 수 있음을 나타냅니다.

Genomics RNAdvance Tissue RIN 점수 그림 5

그림 5

Genomics RNAdvance Tissue RIN 점수 그림 6

그림 6

컬럼 기반 키트 사용자 대비 적은 피펫 작업으로 짧은 시간 안에 샘플에서 RNA 추출

그림 7(위)은 RNAdvance Tissue 키트 또는 컬럼 기반 공급업체 키트를 사용하여 1-96개 샘플에 대해 RNA를 추출한 총 시간을 나타냅니다. RNAdvance Tissue 키트를 사용하면 20개의 샘플에서도 조직에서 RNA를 추출하는 총 시간이 단축됩니다. 그림 8(아래)는 1, 8, 24, 48 및 96개 샘플에 필요한 샘플 내 분배, 샘플 혼합 및 팁 폐기를 포함하는 총 피펫 작업 수를 보여줍니다. 복수 채널 피펫을 사용할 수 있으므로 샘플이 8개 보다 많을 경우에 컬럼 기반 키트에 비해 피펫 작업이 크게 줄어듭니다.

Genomics RNAdvance Tissue 총 시간 그림 7

그림 7

Genomics RNAdvance Tissue 피펫 작업 그림 8

그림 8

RNAdvance Tissue 비주얼 워크플로우

Genomics RNAdvance 조직 워크플로우

  1. 용해 완충액 및 단백질 분해 효소 K을 사용한 조직 용해
  2. RNA를 자성 비드에 결합
  3. 오염 물질로부터 자성 비드 분리
  4. 오염 물질을 제거하기 위해 세척 완충제 및 70 % 에탄올로 자성 비드 세척
  5. 샘플을 DNase로 처리
  6. 세척 완충제를 사용하여 RNA를 자성 비드에 재결합
  7. 오염 물질을 제거하기 위해 70% 에탄올로 자성 비드 세척
  8. 자성 비드에서 RNA를 용출
  9. 저장을 위해 새로운 플레이트로 이동합니다.

배치 크기 또는 전체 처리량을 기준으로 수동 또는 자동화 방법에 사용

다음은 8, 24 및 96 RNAdvance Tissue RNA 추출을 수행하는 데 필요한 예상 수동 실험 시간 및 총 시간(시간)입니다. 이 추출 작업은 수동 또는 자동 분주 시스템에서 자동으로 수행할 수 있습니다. 자동화 시간은 Biomek i5 Multichannel 96 Genomics 워크스테이션에서 수행된 추출 작업을 반영합니다. 수동과 자동화의 시간 차이를 확인할 수 있습니다(NR=권장되지 않음).

RNAdvance Tissue 수동 자동화
배치 크기 8 수동 시간 0.08 0.25
총 시간 1.00 2.50
24 수동 시간 0.11 0.25
총 시간 1.10 2.50
96 DNase 처리 없음 수동 시간 NR 0.25
총 시간 NR 2.00
96 수동 시간 NR 0.25
총 시간 NR 2.50

조직에서 RNA를 추출하기 위한 RNAdvance Tissue 제품

RNAdvance Tissue는 처리량 요구에 따라 세 가지 크기의 키트로 제공됩니다. 구매하거나 견적을 요청하려면 아래의 특정 부품 번호를 클릭하십시오. 자세한 내용은 RNAdvance Tissue가 포함된 조직에서 RNA 분리 페이지를 참조하십시오.

부품 번호 이름 PREP
A32645 RNAdvance Tissue 키트 50
A32649 RNAdvance Tissue 키트 96
A32646 RNAdvance Tissue 키트 384

 

 

질병 또는 기타 상태의 진단 용도로 의도되거나 검증되지 않았습니다.
여기에 언급된 벡크만쿨터, 스타일 로고 및 벡크만쿨터 제품 및 서비스 마크는 미국 및 기타 국가의 Beckman Coulter, Inc. 상표 또는 등록 상표입니다. 다른 모든 상표는 해당 소유자의 자산입니다.

 

 

 

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